L’électroporation ou ciblage d’un gène dans les cellules souches embryonnaires (SE) consiste à intégrer un vecteur de ciblage dans les cellules SE en augmentant la perméabilité des membranes cellulaires par l’application d’impulsions électriques. Les cellules sont ensuite sélectionnées à l’aide d’un antibiotique et 200 clones isolés sont soumis à l’identification par ciblage homologue du vecteur dans les cellules SE. Le laboratoire de transgénèse fournit tous les réactifs, les matières plastiques et les milieux nécessaires pour l’électroporation des cellules SE avec le vecteur de ciblage. Nous fournirons jusqu’à 200 clones individuels à être criblés par le chercheur et conserverons des dupliquas de clones à -80 °C. Ces clones de réserve peuvent éventuellement servir à confirmer les clones positifs et créer des souris chimériques par micro-injection. L’isolation de l’ADN des clones et le criblage de ces clones seront effectués par le laboratoire des chercheurs.

Pour demander une électroporation des cellules souches, vous devez fournir :

1. Le formulaire du Laboratoire de transgénèse « J –,  Demande de service – Électroporation des cellules souches;
2. 25 à 30µg d’ADN linéarisé dilué dans un tampon stérile à une concentration de 100ng/µl;
3. Une photo d’ADN linéarisé sur un gel avec les marqueurs appropriés;
4. Tous les chercheurs du CRCHUM doivent fournir un numéro de protocole valide avant que notre laboratoire effectue les micro-injections.  On peut se procurer tous les formulaires requis pour obtenir un nouveau numéro de protocole ou une modification de protocole sur l’Intranet  section CIPA/ Formulaires.
5.  Les chercheurs provenant d’autres établissements doivent fournir un numéro de protocole valide de leur établissement avant que nous puissions procéder à réaliser le service demandé. 

Nous fournirons pour chaque électroporation :
1. Un minimum de 200 clones isolés pour que le demandeur puisse faire son  identification du ciblage homologue :
2. La congélation des clones à -80 °C. jusqu'à ce que le demandeur confirme  les résultats.

Tarifs

Information : : Mitra Cowan, responsable du service
mitra.cowan.chum@ssss.gouv.qc.ca
514 890-8000 poste 35224