Le laboratoire de transgénèse fournit un service de micro-injection de cellules souches embryonnaires (SE) ciblées dans des embryons au stade de blastocystes afin de créer des souris chimères.  Nous offrons également des conseils techniques, des plasmides et des cellules SE pour créer des constructions « ciblantes ».  Ceci comprend l’aide apportée pour  l’électroporation et la sélection de cellules SE aussi bien que l’agrégation à la fois des embryons et des cellules SE.  Pour obtenir de l’aide concernant ces protocoles, veuillez communiquer avec Mitra Cowan à : mitra.cowan.chum@ssss.gouv.qc.ca.
 
Pour demander la micro-injection de cellules SE, vous devez fournir :

1. Le formulaire Laboratoire de transgénèse « I », Demande de service – Construction de souris ou rat transgénique et microinjection de cellules souches;
2. Tous les chercheurs du CRCHUM doivent fournir un numéro de protocole valide avant que notre laboratoire effectue les micro-injections.  On peut se procurer tous les formulaires requis pour obtenir un nouveau numéro de protocole ou une modification de protocole sur  l’Intranet  section CIPA/ Formulaires.
3. Les chercheurs provenant d’autres établissements doivent fournir un numéro de protocole valide de leur établissement avant que nous puissions procéder à réaliser le service demandé. 

Pour effectuer les injections du blastocyste, on se conforme au principe du premier arrivé, premier servi.  Il nous fera plaisir de fournir un devis estimatif avant la micro-injection.

Le service comprend pour chaque séance de micro-injections de cellules souches :

1. La micro-injection de 100 à 120 embryons au stade de blastocyste.  Selon le nombre de clones SE et leur qualité, nous diviserons le nombre de clones injectés dans les blastocystes selon la préférence du chercheur;
2. Le transfert chez un minimum de dix femelles pseudogestantes.

Malheureusement, nous ne pouvons garantir le nombre ou le pourcentage de chimères générées ou la transmission des lignées germinales.  Nous avons découvert qu’à cause de la variabilité entre les différentes lignées de cellules SE et la façon dont elles sont manipulées par les divers laboratoires, il est impossible de prévoir le résultat.  Deux raisons principales expliquent pourquoi les clones de cellules SE ciblées ne produisent pas de cellules germinales.  La première est qu’ils ont commencé à se différencier et ont perdu leur pluripotentialité ou leur capacité de contribuer à la lignée germinale.  Ceci peut se produire pour un certain nombre de raisons, telles que le d’un nombre élevé de passages ou une mauvaise technique de culture cellulaire, etc.  La seconde raison est que les clones de cellules SE sont devenus aneuploïdes c’est à dire qu’ils n’ont plus le nombre normal de chromosomes.  Si un clone de cellules SE n’a pas 40 chromosomes, il peut créer des chimères mais il ne peut pas contribuer à la lignée germinale et ne transmettra jamais la mutation ciblée.  Nous fournissons un service de caryotypage de clones de cellules SE pour pouvoir évaluer s’ils sont euploïdes.  Veuillez consulter notre rubrique caryotype de cellules embryonnaires.

Nous offrons un service d’élevage des chimères en collaboration avec le service des animaleries  dans le but de vous fournir des animaux hétérozygotes. Des frais supplémentaires sont appliqués pour ce service.

Tarifs

Information : : Mitra Cowan, responsable du service
mitra.cowan.chum@ssss.gouv.qc.ca
514 890-8000 poste 35224